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表达质粒pSC101温敏型的问题求教
[版面:生物学][首篇作者:HITer2011] , 2019年05月15日22:53:25 ,214次阅读,2次回复
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HITer2011
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发信人: HITer2011 (HITer2011), 信区: Biology
标  题: 表达质粒pSC101温敏型的问题求教
发信站: BBS 未名空间站 (Wed May 15 22:53:25 2019, 美东)

最近想用pSC101质粒,发现有温敏型的质粒pSC101ts,常用于基因编辑后用高温消除
pSC101质粒。

我想了解一下哪些突变造成了温敏型。在温敏型pKD46质粒和原始pSC101比较序列,发
现在ori位置有个NotI位点的插入,是否是造成温敏型的原因。另外,在Rep101有两个
碱基序列不一致的地方(原始质粒的碱基6042 G/A、碱基6137 C/T和Rep101编码区后面
的碱基6299 G/C),在pKD46中,CGT编码R257而原始pSC101是CAT编码H257,有文章说
是原始质粒测序有错误,应该是如pKD46质粒中的CGT编码R257 (碱基6042 G/A)。另
外一处是pKD46的Y289(TAT密码子,碱基6137 C/T),而原质粒是H289(CAT密码子)
。有人说这个突变造成pKD46成温敏型的原因。在Rep101之后还有一个点突变,原始质
粒的G突变成温敏型质粒的C (碱基6299 G/C)。

感谢有经验的同学指教。谢谢。
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Noahgen
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发信人: Noahgen (), 信区: Biology
标  题: Re: 表达质粒pSC101温敏型的问题求教
发信站: BBS 未名空间站 (Sat May 25 19:05:38 2019, 美东)

好像别的PLASMID也可以用高温CURE。前几天还看到那谁谁说冷冻也可以。
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Noahgen
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发信人: Noahgen (), 信区: Biology
标  题: Re: 表达质粒pSC101温敏型的问题求教
发信站: BBS 未名空间站 (Sat May 25 19:06:39 2019, 美东)

能送个pSC101吗?
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※ 来源:·WWW 未名空间站 网址:mitbbs.com 移动:在应用商店搜索未名空间·[FROM: 2605:e000:141f:]

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